摘要:为了克隆人脂联素基因(ACRP30),获得有免疫活性的重组人脂联素,以人皮下脂肪组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR得到ACRP30基因。构建重组质粒pET-CKS-ACRP30,转化表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达人脂联素重组蛋白,利用镍亲和层析纯化,Western blot鉴定其活性,双抗体夹心法检测其免疫活性。获得了人脂联素基因,表达纯化了人脂联素融合蛋白,融合蛋白分子质量约为50ku,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯度达到90%,双抗体夹心法检测重组蛋白具有免疫活性。本研究成功表达了人脂联素重组蛋白且表达产物具有免疫活性,为人脂联素检测技术的建立奠定了基础。
关键词:
人脂联素;原核表达;免疫活性
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