1

全基因合成

包含目的基因合成与亚克隆，可选择的表达载体以pET和pGEX系列为主。服务周期：2-3周。

2

原核蛋白表达及纯化

包括E.coli表达菌株转化、筛选、表达和纯化，可选择的表达菌株：BL21 (DE3)、Rosetta-gami (DE3)、OrigamiB (DE3)、Rosetta (DE3)等。服务周期：3-4周。

1

Poly-Arg

0.80kDa，阳离子交换树脂，NaCl线性洗脱(0–400 mM)

2

Poly-His

0.84kDa，Ni²⁺琼脂柱，20–250 mM咪唑/低pH

3

FLAG

1.01kDa，FLAG抗体亲和琼脂柱，2–5 mM EDTA

4

Strep-tag II

1.06kDa，链亲和素，2–25 mM脱硫生物素

5

c-myc

1.20kDa，myc抗体亲和琼脂柱，低pH

6

S-tag

1.75kDa，S蛋白琼脂柱，3 M异硫氰酸; 0.2 M柠檬酸钾, pH 2或3 M MgCl₂

7

Fh8

8.0kDa，Ca²⁺依赖性苯基琼脂糖凝胶，10 mM EDTA

8

Trx

11.7kDa，4氨基氧化苯胂琼脂凝胶柱，5–1000mM 2-巯基乙醇

9

SUMO

12.0kDa，亲和标签纯化（His）

10

BRT17

14.7kDa，25–75 mM Ca2+溶液沉淀

11

GST

26.0kDa，谷胱甘肽琼脂柱，10–20 mM还原谷胱甘肽

12

HaloTag7

34.0kDa，氯烷烃配体琼脂柱，带标签挂柱蛋白酶裂解

13

MBP

42.5kDa，交联支链淀粉，10 mM麦芽糖

14

ELPs

47.0kDa，高浓度NaCl (>1.5 M)或温度转变方式

15

NusA

54.8kDa，亲和标签纯化（His）

1

酵母表达载体亚克隆

密码子优化，基因合成(或客户提供质粒模板：目的基因扩增)

将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上，可提供表达载体，如pPICZaA 、pGAPZaA、pPIC9K

拼接序列验证：测序

交付：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序原始报告

2

酵母表达菌株转化

可提供表达菌株：X33，GS115，酿酒酵母等。

扩增培养5-10个阳性克隆并进行重组蛋白诱导表达

SDS-PAGE交付：阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。

3

酵母表达菌株筛选

检测重组蛋白表达情况（适用于多拷贝数和高表达菌株）

交付：阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。

4

酵母表达菌株表达优化

对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，甲醇浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量

5

小规模蛋白表达及纯化

1L发酵液通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

SDS-PAGE交付：重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度>85%。

6

大规模蛋白表达及纯化

10L，30L，80L,130L,500L发酵规模

7

增值服务

通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。

蛋白质N端测序：PPSQ31（Edman降解法测序仪）

1

 凝胶过滤层析

根据分子间的大小或者形状差异进行分离，特别适用于分离相对分子质量大于2000的高分子化合物和相对分子质量差异大的混合物及低聚物。

2

离子交换层析

根据蛋白质分子表面静电荷的差异进行分离，阳离子交换主要是改变pH，主要应用于等电点大于5的蛋白质；阴离子交换主要是改变盐浓度，适用于大部分蛋白质，除杂能力较强，对热源质、核酸、外毒素及电荷性有差别的蛋白效果显著。

3

疏水层析

根据蛋白质与疏水吸附剂之间的疏水作用差异进行分离，适用范围广，原则上可用于所有蛋白质的纯化，适合于从大体积中提取低含量的目标蛋白，对DNA及小牛血清去除率较高。

4

亲和层析

根据生物活性物质与特异性配体间的特异性亲和力来达到分离目的，适用于抗原抗体亲和纯化，以及一系列标签纯化。

1

HIS Tag

一般为6-8个组氨酸组合，标签小，纯化简单；能与其他标签形成双标签；能纯化可溶性/包涵体蛋白。组氨酸残基上的咪唑基团可与层析介质中的金属离子螯合，再通过提高缓冲液中咪唑浓度进行竞争性洗脱达到纯化效果。

2

GST Tag

26KD，可溶性标签，提高蛋白表达的可溶性；不能应用于包涵体等需变形处理的纯化；利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱原理来进行纯化。

3

Flag Tag

8个氨基酸DYKDDDDK，在真核表达系统中表达效率更高；

可以纯化有活性的融合蛋白，琼脂糖上偶联有flag抗体，可采用竞争性洗脱或酸性洗脱。

4

MBP Tag

42.5 KD，多糖树脂吸附，可以减少目标蛋白的降解，增加蛋白的表达量和稳定性，提高表达产物的水溶性，但标签较大，对蛋白的结构和功能会有一定影响。适用于包涵体的纯化。

5

Strep Tag

8个氨基酸WSHPQFEK，生物素（biotin）和抗生物素蛋白链菌素（streptavidin）之间的结合反应。纯化流程温和能保持目标蛋白活性；能进行变性条件下的纯化；价格相对HIS Tag而言较高。

1

天然大分子蛋白分离纯化

选用适当孔径的分子筛分离纯化，配合使用阴、阳离子吸附柱以及HLPC，鉴定并收取相应洗脱峰。

2

天然小分子蛋白分离纯化

多层级分离过滤配合分子筛去除大分子杂质，结合使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子蛋白，经 HPLC和MS鉴定纯化。

3

混合未知蛋白样品分离纯化

由卡梅德生物制定相应方案进行分离纯化，并经质谱鉴定、活性鉴定等多种方案确认分离产物。                     

1

重组蛋白脱标签及分离纯化

商品化亲和纯化树脂，如Ni柱，GST-Beads等分离纯化带有6xHis、GST、SUMO、MBP融合蛋白，获得纯度90%以上融合蛋白

2

不含标签的重组蛋白纯化

抗体亲和纯化；也可选择类似于天然蛋白纯化方式，依项目而定

3

包涵体变性与复性纯化

根据蛋白质不同的性质，可以选择尿素、盐酸胍、去垢剂、极端pH等，以保证最大程度获得单体状态的变性蛋白