摘要:目的克隆人Angiostatin K(1-3)基因,获得有活性的重组人血管抑素蛋白,为进一步开发应用奠定基础。方法以人新鲜肝脏组织为材料,通过RT-PCR得到人Angiostatin基因的AK(1-3)片段。构建重组质粒pET30a-Angiostatin,转化表达菌Rosetta(DE3),对转化子进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的产物,并验证其活性。结果获得了人Angiostatin基因AK(1-3)片段的正确序列,表达和纯化了人血管抑素蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%,纯化后证明表达产物具有较高纯度(达到90%)。结论AngiostatinK(1-3)可在原核融合蛋白表达载体中表达,且得到有活性的目的蛋白。
关键词:血管生成抑制剂;包涵体;基因表达;印迹法,蛋白质;
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