摘要:通过RT-PCR方法克隆了猪瘟病毒(CSFV)5′端非编码区(UTR)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板。同时根据GenBank中的靶序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针。通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了CSFV检测的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为19.73、22.95和26.24;变异系数分别为0.61%、1.77%和1.18%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性。对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度。
关键词:猪瘟病毒;荧光定量PCR;TaqMan探针;
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